膠原蛋白是動物體內(nèi)重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白含量的25%。膠原蛋白肽，是膠原蛋白適度降解后形成的一種多肽，具有抗氧化、抗衰老、降血壓、促進皮膚膠原代謝、免疫調(diào)節(jié)等多種生理功能。
目前，制備膠原蛋白肽最常用的是酶解法和微生物發(fā)酵法，本文總結(jié)了這兩種膠原蛋白肽的制備方法。
01
酶解法
工藝流程：
①羅非魚皮的粉碎 → ②堿溶酸沉提蛋白 → ③膠原蛋白粗提物的精制 → ④
膠原蛋白肽的制備
操作要點：
?、倭_非魚皮的粉碎：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經(jīng)打粉機粉碎。
?、趬A溶：在羅非魚皮中加入0.5%的氫氧化鈉溶液浸泡2h，清洗2次，再加入蒸餾水，在研磨機中勻漿至糊狀，制得總蛋白粗提物。
?、鬯岢粒簩⒖偟鞍状痔嵛镎{(diào)整pH值為2，加熱至75℃，保溫提膠3h，制得膠原蛋白粗提物。
?、苣z原蛋白粗提物的精制：將澄清劑加入膠原蛋白粗提物中，調(diào)整pH值為2，攪拌均勻后靜置2h，制得膠原蛋白精制物。
其中，澄清劑為秋葵膠，仙草膠，瓜爾豆膠以質(zhì)量比1:2:4混合并靜置4-6h，澄清劑的加入量為膠原蛋白粗提物質(zhì)量的0.1-2%，澄清劑的pH值為2-4。
?、菽z原蛋白肽的制備：將膠原蛋白精制物調(diào)節(jié)pH值為7，加入復(fù)合蛋白酶酶解，在溫度為45℃的條件下，酶解2h，得到酶解液。
其中，復(fù)合蛋白酶為堿性蛋白酶和風味酶，質(zhì)量比為5:2,組合酶的加入量為膠原蛋白精制物質(zhì)量的0.4%-1%，酶解pH值為7.5-8.0。
02
以羅非魚魚皮為原料，利用枯草芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵制備膠原蛋白肽。
工藝流程：
?、倭_非魚皮粉 → ②固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備 → ③種子液的制備 → ④接種、發(fā)酵 → ⑤加水過濾（紗布） → ⑥粗酶液的制備 → ⑦過濾、凍干 → ⑧膠原蛋白粗肽
工藝要點：
①魚皮的預(yù)處理：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經(jīng)打粉機粉碎，冷凍至-20℃，密封備用。
?、诠虘B(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：將處理好的魚皮進行滅菌（121℃高溫滅菌20 min），再在無菌條件下加入一定量的滅菌蒸餾水，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH，作為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
③種子液的制備：將B.subtilis CCTCC AB 90008從甘油保藏管接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，將活化好的菌種接至種子培養(yǎng)基（牛肉膏3 g/L，蛋白陳10 g/L，NaCl5 g/L，pH 7.2～7.4）中，于37 ℃、120r/min搖床培養(yǎng)一定時間，制得種子液。
④接種、發(fā)酵：按菌種接種量50 g/L接入培養(yǎng)好的發(fā)酵種子液，恒溫靜置培養(yǎng)，并每隔5h攪拌1次。發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基初始pH值為7，種子液菌齡為14 h，發(fā)酵溫度為35 ℃，發(fā)酵時間為24 h。
?、荽置敢旱闹苽洌喊l(fā)酵結(jié)束后，向魚皮培養(yǎng)基中加入0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.2），于5 000 r/min離心15 min，取上清液作為膠原酶粗酶液。
?、捱^濾、凍干：用0.45 μm的濾膜過濾發(fā)酵液，初步去除發(fā)酵液中的雜質(zhì)，收集濾液進行凍干，得固態(tài)發(fā)酵羅非魚皮膠原蛋白粗肽。
